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细菌的接种分离和鉴定2013.10

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细菌的接种分离与鉴定2013.10
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细菌的接种、分离与鉴定思路 邵阳市第一人民医院检验科 罗甫花 常用细菌培养方法 • 需氧培养法(一般培养) 适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养。 培养温度:37℃(采用恒温培养箱)。 培养时间:18~24h。 • 二氧化碳培养法 适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。 可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。 • 微需氧培养法 适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌培养。 可采用抽气换气法。 • 厌氧培养法 适用于专性厌氧菌培养。 厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸 盐法等。 细菌接种的基本程序 灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌,以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌,以免污染环境 带菌接种环的正确烧法 • 热导法:从环的根部(靠近柄部)开始烧,通过热传导让 接种环或针上带的菌慢慢受热,直至干燥,最后放在氧化 焰(外层温度高)上彻底灭菌。 • 从还原焰开始法:(内层温度低),带菌的接种环或针直 接置于此不会引起气溶胶喷溅,待完全干燥后再移至氧化 焰部位彻底灭菌。 接种方法 平板划线法 原则和目的:通过划线稀释细菌 获得单个菌落 • 要领: G 划线均匀而细密,不重复。 A 充分的利用培养基的面积。 B 培养基不能划破。 GB 培养时培养皿倒置。 培养时培养皿倒置的原因 一 防止培养基的水分蒸发 二 防止形成的冷凝水滴落在培养基上造成染菌 三 倒放可以在某种程度上防止菌落蔓延,好形 成单个菌落,利于计数 四 防止外来的污染 平板划线法 (1)连续划线法 此法多用于含菌量相对少,无菌部位 来源的如血液,胸腹水,脑脊液等标本的 细菌分离培养。 (2)分区划线法(可分二区,三区和四区) 此法多用于含菌量较多的粪便、脓汁 等标本的细菌的分离培养。 • 第一区划线 • 灭菌接种环 • 第二区划线 • 灭菌接种环 • 第三区划线 • 灭菌接种环 ((3 3)密集划线法)密集划线法 此法用于纸片药敏实验培养此法用于纸片药敏实验培养 用于药敏实验 细菌在固体培养基中生长表现:细菌在固体培养基中生长表现: 1 1、大小、大小 (( mmmm表示。表示。1mm1mm以内露滴状;以内露滴状;1-2mm1-2mm小小 菌落。菌落。2- -4mm2- -4mm中等大菌落;中等大菌落;4-6mm4-6mm以上称大菌落或巨以上称大菌落或巨 大菌落)大菌落) 2 2、形状、形状 (圆形、不规则形)(圆形、不规则形) 3 3、边缘、边缘 (整齐、锯齿状)(整齐、锯齿状) 4 4、表面性状(光滑、粗糙、)、表面性状(光滑、粗糙、) 5 5、隆起度(扁平、隆起、中凸)、隆起度(扁平、隆起、中凸) 6 6、颜色及透明度(黄色、灰白、光泽、透明)、颜色及透明度(黄色、灰白、光泽、透明) 7 7、硬度(干燥、湿润、粘液)、硬度(干燥、湿润、粘液) 8 8、溶血(在、溶血(在血培养基血培养基上的表现)上的表现) •试管培养基接种法 • 琼脂斜面接种法 该法主要用于纯种增菌及保存菌种,也可用 于某些生化鉴定试验如双糖铁培养基的接种。 斜面 培养 基 • • 手执塑料杆手执塑料杆处处 小指夹棉塞 • •试管口离火焰试管口离火焰1cm1cm • •手执试管底露出斜面手执试管底露出斜面 操作顺序:操作顺序: 接种环灭菌 勾取细菌 取棉塞 接种 塞棉塞 接种环灭菌 标记 培养 。 细菌分离培养 选择适合细菌生长的条件和温度 按按无菌操作无菌操作 选择适合细菌生长的培养基选择适合细菌生长的培养基 接种量少接种量少 革兰氏染色法步骤 一般包括初染、媒染、脱色、复染 1)涂片干后加热固定。 2)结晶紫染30s,水洗 3)加碘液约30s,水洗 4)加95%酒精数滴,摇动脱色,30秒-1 分钟,至无紫色脱落为止,水洗 5)加复红染色染,染30秒后,水洗。 干燥,镜检。 +C鉴定思路 乳糖- 触酶+ 微球菌科 O/F试验氧化型 微球菌属 h2o2+ 触酶- 链球菌科 血浆凝固酶- 新生霉素敏感试验S 表皮葡萄球菌 O/F试验发酵型 葡萄球菌属 血浆凝固酶+ 金黄色葡萄球菌 新生霉素敏感试验R 腐生葡萄球菌 Mac生长试验阳性 肠链球菌属 靛基质- Mac生长试验阴性 α溶血Optochin S为肺链 R为甲链 β溶血 杆菌肽S为A群链 CAMP试验+为B群链 -b鉴定思路 乳糖- OX+双糖- 非发酵菌科 鞭毛染色-为 黄杆菌属莫拉 菌属 h2o2+ OX –双糖+ 肠杆菌科 端鞭毛为假单胞 一根鞭毛为绿脓 周鞭毛为产碱杆菌 动力-NIT-不动杆菌 动力+NIT+嗜麦牙单胞菌 IMVC + + - -为大肠 -- + +为产气和肺克 -+ - +为沙门 D + - -为志贺 PD 葡萄糖酸盐 Ox-双糖- 非发酵菌科 Ox+双糖发酵型 弧菌科 0/129R为气单胞菌 S为弧菌属和霍乱弧菌 实验安排: • 每人一个营养琼脂平皿做划线分离,要求分出 单个菌落。(培养时倒置) • 每人一支营养琼脂斜面做斜面接种。
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