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HBV基因分型和耐药突变基因检测的临床应用

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HBV 基因 耐药 突变 检测 临床 应用
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HBV基因分型和耐药突变基因检测的 临床应用 产品介绍 1 2 背景介绍 主 要 内 容 乙型病毒性肝炎 是由乙型肝炎病毒 HBV 引起的肝脏炎性损害 是我国当前流行最广泛 危害最严重的一种传染病 HBV感染呈世界性流行 但不同地区HBV感染的流行强度差异很大 据世界卫生组织报道 全球约20亿人曾感染过HBV 其中3 5亿人 为慢性HBV感染者 每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭 肝硬化和原发性肝细胞癌 HCC 1 1 World Health Organization Hepatitis B World Health Organization Fact Sheet 204 dex Revised October 2000 WHO Web site http www who int mediacentre factsheets fs204 en in html 流行病学 流行病学 Clinical and Epidemiologic Correlations in HBV Infection Lok AS McMahon BJ Chronic hepatitis B Hepatology 2007 45 507 39 Erratum Hepatology 2007 45 1347 流行病学 2006年全国乙型肝炎流行病学调查结果表明 我国 1 59岁人群乙肝表面抗原携带率为7 18 据此推算 我国现有的慢性HBV感染者约9300万人 其中慢性乙型肝炎患者约2000万例 2 2 慢性乙型肝炎防治指南 2010年版 中华医学会肝病学会 中华医学会感染病学分会 2010年12月10日 病原学 HBV hepatitis B virus 乙型肝炎病毒 属嗜肝病毒科 基因组长约3 2Kb 为部分双链环状DNA HBV已发现有A I 9个基因型 在我国以C型和B型为 主 包膜 HBsAg 糖蛋白 细胞脂肪 核心 HBV DNA DNA Polymerase HBcAg 病原学 HBV侵入肝细胞后 部分双链 环状HBV DNA在细胞核内以负 链DNA为模板延长正链以修补 正链中的裂隙区 形成共价闭合 环状DNA cccDNA 然后以 cccDNA为模板 转录成几种不 同长度的mRNA 分别作为前基 因组RNA和编码HBV的各种抗 原 cccDNA半寿 衰 期较长 很难 从体内彻底清除 HBV感染和发发展的结结局图图 HBV感染可有不同的发展和 结局 这是由病毒和宿主双方 因素决定的 病毒方面 感染的数量和毒株 的异质性 以及传播的方式 宿主方面 免疫状态 以及决 定免疫状态的年龄 遗传素 质 基础健康状况和并存的疾 病 自然史 诊断 临临床诊诊断 既往有乙型肝炎病史或HBsAg阳性超过6个月 现HBsAg和 或 HBV DNA仍为阳性者 可诊断为慢性HBV感染 可分为 慢性乙型肝炎 乙型肝炎肝硬化 携带带者 隐隐匿性慢性乙型肝炎 实验实验 室诊诊断 生物化学检查检查 ALT AST 血清白蛋白 PT 胆碱酯酶 AFP 血清学检查检查 HBV DNA 基因型和变变异检测检测 定量检测 分型和耐药突变检测 影像学诊诊断 病理学诊诊断 治疗 慢性乙型肝炎治疗疗的总总体目标标 最大限度地长期抑制HBV 减轻肝细胞炎症坏死及肝纤维化 延缓 和减少肝脏失代偿 肝硬化 HCC及其并发症的发生 从而改善生活质 量和延长存活时间 慢性乙型肝炎治疗疗 抗病毒 免疫调节 抗炎和抗氧化 抗纤维化和对症治疗 抗病毒治疗疗是关键键 只要有适应证应证 且条件允许许 就应进应进 行规规范 的抗病毒治疗疗 干扰扰素 直接抗病毒作用和免疫调节调节 作用清除病毒 我国已批准普通IFN 2 2b和1b 和聚乙二醇干扰素 2 和2b 用于治疗慢性乙型肝炎 HBV基因型与疾病进进展和干扰扰素 治疗疗效果有关 与C基因型感染者相比 B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换 较少进展为慢性肝炎 肝硬化和原发性肝细胞癌 HBeAg阳性患者对干扰素 治疗的应答率 B基因型高于C基因型 A 基因型患者高于D基因型 治疗 治疗 核苷 酸 类药物 竞争性抑制HBV DNA聚合酶 参与新的HBV DNA链合成过程中 终止新链合成 目前已应用于临床的抗HBV核苷 酸 类药物有3类 我国已上市4种 核苷 酸 类似物 L 核苷类似物无环磷酸酯环戊烯 拉米夫定 LMV阿德福韦酯ADV恩替卡韦ETV 恩曲他滨 ETB替诺福韦TDF阿巴卡韦ABV 替比夫定 LdT 克立夫定 CLV 治疗 耐药是核苷酸类药物的共性 耐药检测的意义 治疗疗前检测检测 有助于临临床判 断用药药是否有效 治疗疗中每3 6个月检测检测 有助 于观观察疗疗效 及时调时调 整用药药 EASL Clinical Practice Guidelines Management of chronic hepatitis B European Association for the Study of the Liver J Hepatol 2009 50 227 242 HBV基因分型和耐药突变基 因检测产品介绍 乙型肝炎病毒分型和耐药药突变变基因检测试剂检测试剂 盒 PCR 反向点杂杂交法 国食药监械 准 字2011第3401179号 样本处理 芯片制备 产品用途 在抗病毒治疗前和治疗中对血清 血浆中的HBV进 行基因分型和耐药突变基因检测 1 1 2 2 区分中国和其他亚洲国家常见的HBV B C D基因型 检测HBV 3类抗病毒药物5个热点突变位点的6种突变类型 HBV耐药突变基因检测的临床意义 1 抗病毒药物治疗前的药物选择 在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前 进行耐药突变基因检 测 可以指导临床医生合理选择抗病毒药物 真正实现个 体化诊治 2 抗病毒药物治疗中的药效监测 在慢性乙肝患者抗病毒药物治疗过程中 进行耐药突变基 因检测 可以监测抗病毒药物治疗效果并及时调整治疗方 案 HBV基因分型的临床意义 1 预测疾病进展 与C基因型感染者相比 B基因型感染者较早出现HBeAg 血清学转换 较少进展为慢性肝炎 肝硬化和原发性肝 细胞癌 2 治疗疗方案的选择选择 HBeAg阳性患者对干扰素 治疗的应答率 B基因型高于 C基因型 A基因型患者高于D基因型 3 流行病学调查调查 研究 1 1 准确性 准确性 检测105例临床慢性HBV感染阳性样本 结果与测序比较 显示为相同的基因型和耐药突变类型 准确率为100 2 2 特异性 特异性 检测50例临床HBV阴性样本结果全部为阴性 检测非HBV 感染性病原体DNA 包括C型肝炎病毒 HCV 乙型脑炎病毒 梅 毒螺旋体和HIV 结果均为阴性 3 3 灵敏度 灵敏度 能稳定检测血清HBV的最低检出限为1 0 103IU mL 4 4 精密度 精密度 检测2 0 103IU mL的血清HBV 批内和批间的一致性好 5 5 稳稳稳稳定性 定性 产品有效期为6个月 在有效期内产品性能稳定 产品性能指标 产品使用 产品操作流程 产品使用 HBV膜条探针阵针阵 列图图 rt reverse transcriptase 逆转录酶 以逆转录酶编码氨基酸的顺序命名各检测位点 如 rt180L表示逆转录酶编码氨基酸第180位为亮氨酸 CC为显色控制点 试验成立的条件 显色控制点CC正常显色 阳性质控品正常显色同时阴性质控品除CC外其他所有阵列位点不显色 结果判读 根据显色 蓝色斑点 出现的阵列位点直接判读HBV的基因型和耐药突 变类型 示例 产品使用 产品使用 结果判读示例 交叉耐药突变与核苷类似物药物的关系表 注释 耐药水平分高 中 低三级 以体外实验IC50的变化倍数计算 变化倍数是相比较于野生株而言 IC50指 最大药物抑制浓度的一半 低 IC50 5 中 IC50为5 20 高 IC50 20 LMVLdTADVTDFETV rtL180M中中 低 rtM204V I高高高高 中 rtV M207I中低 rtA181V中中中低中 rtN236T低 中 Marc Chany T Jake Liang Drug targets and molecular mechanisms of drug resistance in chronic hepatitis B Gastroenterology 2007 132 1574 1585 产品使用 适用人群及科室 适用人群 慢性乙肝患者的用药指导及疗效监测 科室 检验科 感染科 消化内科 肝病科等 使用原则 慢性乙肝患者抗病毒药物治疗前进行检测 确定HBV基因 型和是否发生耐药突变 指导选择敏感的治疗药物 在抗病毒治疗过程中建议3 6个月进行一次检测 实时监 控耐药突变的发生 检测后的处理 慢性乙型肝炎防治指南 2010年版 u 对于接受拉米夫定治疗的患者 一旦检出基因型耐药或HBV DNA 开始升高时就加用阿德福韦酯联合治疗 抑制病毒更快 耐药发 生较少 临床结局较好 u 对于替比夫定 恩替卡韦发生耐药者 亦可加用阿德福韦酯联合 治疗 u 对于阿德福韦酯耐药者 可加拉米夫定 替比夫定 恩替卡韦联 合治疗 u 对于未应用过其他核苷 酸 类药物者 亦可换用恩替卡韦 u 对于核苷 酸 类药物发生耐药者 亦可考虑改用或加用IFN类 联合治疗 但应避免替比夫定和PegIFN联合应用 因为可导致外 周神经肌肉疾病
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